Nome: Anticorpo Stripping Solution
Número de catálogo: L7710A, 500ml * GV0480, 500ml 5X
* Reagentes suficientes para 3000 cm2 ou 200-400 tiras de membrana ou 20-40 blots padrão
• Armazenamento: Armazenar em temperatura ambiente (para um armazenamento longo: + 4C °) (L)
● Mercaptoetanol sem cheiro forte. Economize tempo
● A remoção do anticorpo é feita em temperatura ambiente. Nenhum aquecimento de manchas necessário Economiza amostras caras ● Retira os
anticorpos em apenas cerca de 15 minutos em temperatura ambiente Econômico
● O re-bloqueio de manchas pode ser evitado na maioria dos casos

Tampão de remoção de Western Blot

Buffer de bloqueio	Agente de bloqueio	luzes	Quando usar	Formatos disponíveis
Bloco de partida	Proteína purificada simples sem soro e biotina	Apresenta um bom desempenho com uma ampla gama de anticorpos e combinações de anticorpos. Compatível com sistemas de estreptavidina Bloqueia em menos de 15 minutos	Melhor para proteínas abundantes med-high ou forte afinidade de anticorpos Fundo alto com buffer de bloqueio atual Removendo e repassando western blots	PBS TBS PBST TBST
Blocker FL	Proteína purificada simples	Bloqueia o excesso de locais de ligação não específicos para ajudar a reduzir a fluorescência de fundo, Funciona com nitrocelulose e PVDF de baixa fluorescência Sem detergente Bloqueia em 15-30 minutos	Western blotting de fluorescência Imagem e armazenamento de manchas de fluorescência secas	10X
Pierce Clear Milk Blocking Buffer	Proteínas do leite clarificadas e estabilizadas	Substituição de alto desempenho para tampões de bloqueio de leite caseiro em aplicações de Western blotting Vida útil longa em temperatura ambiente	Use quando o fundo alto for visto com leite magro Aplicações fluorescentes e quimioluminescentes	Borato, pH 7,6
SuperBlock	Glicoproteína purificada única livre de soro e biotina	A formulação à base de proteínas não contém imunoglobulinas, albumina ou biotina endógena, o que a torna compatível em muitas situações em que os agentes bloqueadores tradicionais falham. Livre de biotina para uso com sistema de estreptavidina Bloqueia em menos de 10 minutos	Fundo alto com buffer de bloqueio atual	PBS TBS PBST TBST
Tampão de bloqueio SEA BLOCK	Soro de salmão Steelhead	Útil em métodos de detecção envolvendo amostras de mamíferos. Particularmente eficaz em aplicações envolvendo imagens de fluorescência	Amostras de mamíferos Western blotting de fluorescência	PBS
Blocker BSA	Albumina de soro bovino purificado	Soluções a 10% de albumina de soro bovino de alta qualidade Proteína purificada única fornece menos chances de reação cruzada com componentes de ensaio do que soro ou soluções de leite	Use quando tiver como alvo fosfoproteínas Melhor usar ao armazenar anticorpos reutilizados no bloqueador	PBS TBS
Blocker Casein	Caseína purificada	O tampão de bloqueio de proteína única oferece menos chances de reação cruzada com os componentes do ensaio do que soro ou soluções de leite	Use quando houver fundo alto com bloqueadores de leite desnatado	PBS TBS
Blocker BLOTTO	Leite em pó desnatado	Solução pronta para usar a 5% de leite em pó desnatado	Conveniência – pronto para usar Produto mais consistente do que bloqueadores caseiros	TBS
Sem proteínas	Composto não bloqueador de proteína	Minimiza ou elimina a reatividade cruzada associada a tampões de bloqueio baseados em proteínas. As combinações de amostra e anticorpo requerem a eliminação de todas as proteínas animais exógenas possíveis no sistema de ensaio para evitar reação cruzada ou extinção da função de sonda desejada	Use quando os bloqueadores à base de proteína causam alto fundo	PBS TBS PBST TBST
Pierce Fast Blocking Buffer	Proteína purificada simples	Bloqueia em 5 minutos	Quando o tempo é essencial	TBS
SuperSignal Western Blot Enhancer	Tratamento de membrana para anticorpos de baixa abundância ou imunorreatividade baixa	Pré-tratamento para membranas de nitrocelulose Reduz a quantidade de anticorpo primário necessário para sondagem	Use quando o anticorpo primário for de 3 a 100 vezes menos anticorpo primário do que o normalmente usado para detectar a proteína de interesse	Pronto para usar

 

 

A remoção e nova sondagem de Western blots oferece várias vantagens:

1. Conservação de amostras caras ou disponíveis apenas em quantidades limitadas;
2. Análise de um determinado blot usando vários anticorpos diferentes, por exemplo, anticorpos específicos de subtipo ou isoforma;
3. Reanálise de resultados anômalos e confirmação com o mesmo ou com um anticorpo diferente;
4. Correção de erros de incubação com o anticorpo errado;
5. Economia de custo em reagentes e tempo com a reutilização do mesmo blot.

Vários protocolos para remoção de anticorpos de Western blots foram publicados, incluindo aqueles que utilizam baixo pH, calor e detergente e agentes caotrópicos. Três protocolos recomendados são apresentados a seguir. O primeiro é aplicável a qualquer sistema de substrato quimioluminescente e usa uma combinação de detergente e calor para liberar os anticorpos. O segundo é comumente usado para aplicações onde os anticorpos devem ser separados de um antígeno e emprega baixo pH para alterar a estrutura do anticorpo de tal forma que o local de ligação não é mais ativo.

O terceiro protocolo emprega o kit de reciclagem de Western Blot ReBlot ™ Plus, que foi especificamente formulado para remover anticorpos de membranas de Western blot. Os benefícios desta abordagem incluem

• Evitar odores relacionados ao β-mercaptoetanol.
• Processamento à temperatura ambiente.
• Remoção de anticorpos em 15 minutos.

Nenhum desses métodos removerá os precipitados coloridos gerados a partir de sistemas de detecção cromogênica (por exemplo, BCIP, 4CN, DAB e TMB). No entanto, ainda é possível analisar o blot com outro anticorpo específico para uma proteína-alvo diferente.

Normalmente, esses protocolos devem ser usados ​​apenas para fins qualitativos, a menos que tenha sido estabelecido que a remoção não afeta quantitativamente um determinado antígeno. Dependendo do método e do tipo de membrana usada, muitos antígenos resistirão a pelo menos 5 ciclos de remoção. No entanto, deve ser levado em consideração que durante cada ciclo de separação, pequenas porções de proteínas imobilizadas por membrana serão removidas. Quando vários antígenos devem ser detectados sequencialmente, é recomendado começar com antígenos que devem ocorrer em menor abundância ou produzir menos sinal.

Aqui estão algumas recomendações adicionais ao planejar um experimento de Western blot com uma ou mais rodadas de remoção de anticorpos.

• As membranas de PVDF são mais robustas do que a nitrocelulose e, portanto, são recomendadas para qualquer protocolo que envolva a remoção de anticorpos.
• A secagem das membranas de PVDF imediatamente após a transferência do gel SDS-PAGE melhora a ligação das proteínas à membrana e é particularmente recomendada quando a extração múltipla é planejada. Membranas de PVDF secas devem ser reumedecidas com álcool antes da primeira rodada de imunodetecção.
• Detecte primeiro os antígenos de baixa abundância.
• Use anticorpos de baixa afinidade antes de anticorpos de alta afinidade.
• Importante:  Embora a secagem de um blot de PVDF seja recomendada imediatamente após a transferência, o blot não deve secar entre as rodadas de imunodetecção. Qualquer molécula residual de anticorpo se ligará permanentemente à membrana se esta secar.

 

Stripping Buffer
GR103020	Genorise Scientific	500 mL	EUR 89

WB Stripping Buffer
AR0153	BosterBio	100mL (for 10 assays for an 5 × 8.5cm blot)	EUR 133.2

West Ez Stripping Buffer
S2100-006	GenDepot	60ml	EUR 97.2

Microarray Stripping Buffer 1X
10250005-1	Glycomatrix	25 mL	EUR 21.5

Microarray Stripping Buffer 1X
10250005-2	Glycomatrix	100 mL	EUR 60.54

Nitrocellulose Stripping Buffer 10X
10750015-1	Glycomatrix	250 mL	EUR 34.22

Nitrocellulose Stripping Buffer 10X
10750015-2	Glycomatrix	500 mL	EUR 60.54

Blot Stripping Buffer 4X, pH 6.8
20960004-1	Glycomatrix	250 mL	EUR 23.24

Blot Stripping Buffer 4X, pH 6.8
20960004-2	Glycomatrix	500 mL	EUR 53.99

Tris-SDS Stripping Buffer, pH 6.8
20920002-1	Glycomatrix	500 mL	EUR 24.17

Tris-SDS Stripping Buffer, pH 6.8
20920002-2	Glycomatrix	1 L	EUR 36.14

Tris-SDS Stripping Buffer, pH 6.8
20920002-3	Glycomatrix	4 L	EUR 115.76

Blot Stripping Buffer II 4X, pH 2.5
20960005-1	Glycomatrix	250 mL	EUR 25.45

Blot Stripping Buffer II 4X, pH 2.5
20960005-2	Glycomatrix	500 mL	EUR 42.24

West Ez Stripping Buffer, Economic Size
S2100-050	GenDepot	500ml	EUR 254.4

West Ez Stripping Buffer, Economic Size
S2100-100	GenDepot	2x500ml	EUR 336

Nylon Membrane Stripping Buffer 10X, Sterile
10750016-1	Glycomatrix	250 mL	EUR 26.54

Nylon Membrane Stripping Buffer 10X, Sterile
10750016-2	Glycomatrix	500 mL	EUR 59.21

Western blot recycling stripping buffer, 50 ml (10X)
90101	Alpha Diagnostics	50 ml	EUR 285.6

Phospho Antibody Stripping Solution
AKR-102	Cell Biolabs	1 kit	EUR 470.4
Description: This reagent allows you to strip phospho antibodies from protein blots and subsequently re-probe the same blot.