Nome: Anticorpo Stripping Solution
Número de catálogo: L7710A, 500ml * GV0480, 500ml 5X
* Reagentes suficientes para 3000 cm2 ou 200-400 tiras de membrana ou 20-40 blots padrão
• Armazenamento: Armazenar em temperatura ambiente (para um armazenamento longo: + 4C °) (L)
● Mercaptoetanol sem cheiro forte. Economize tempo
● A remoção do anticorpo é feita em temperatura ambiente. Nenhum aquecimento de manchas necessário Economiza amostras caras ● Retira os
anticorpos em apenas cerca de 15 minutos em temperatura ambiente Econômico
● O re-bloqueio de manchas pode ser evitado na maioria dos casos
Tampão de remoção de Western Blot
O Western BLoT Stripping Buffer é uma solução para remover anticorpos primários e secundários de membranas de Western blot testadas. A remoção do anticorpo com este tampão pode ocorrer em condições suaves (temperatura ambiente, 30 min de incubação), minimizando a perda de proteína imobilizada da membrana. Ao usar uma membrana de PVDF, a mesma membrana pode ser removida e reexaminada 2 a 5 vezes. Após a remoção, as membranas podem ser sondadas novamente, com uma concentração diferente de anticorpo primário ou com um anticorpo primário totalmente diferente.

Gato. # | produtos | Tamanho | Licença | Quantidade | Detalhes | |
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T7135A | Western BLoT Stripping Buffer | 500 mL | * | |||
O Western BLoT Stripping Buffer é um reagente que pode remover anticorpos primários e secundários de membranas de Western blot. Após o tratamento com o Stripping Buffer, a membrana pode ser reutilizada; é possível sondar a membrana com uma concentração diferente de anticorpo primário ou com um anticorpo primário totalmente diferente. Com este produto, a reação de remoção do anticorpo prossegue sob condições relativamente suaves (temperatura ambiente, 30 minutos) e, portanto, há muito pouca perda de proteína imobilizada da membrana. Ao usar uma membrana PVDF, a mesma membrana pode ser removida e sondada novamente 2–5 vezes. |
Buffer de bloqueio | Agente de bloqueio | luzes | Quando usar | Formatos disponíveis |
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Bloco de partida |
Proteína purificada simples sem soro e biotina |
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PBS TBS PBST TBST |
Blocker FL |
Proteína purificada simples |
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10X |
Pierce Clear Milk Blocking Buffer |
Proteínas do leite clarificadas e estabilizadas |
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Borato, pH 7,6 |
SuperBlock |
Glicoproteína purificada única livre de soro e biotina |
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PBS TBS PBST TBST |
Tampão de bloqueio SEA BLOCK |
Soro de salmão Steelhead |
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PBS |
Blocker BSA |
Albumina de soro bovino purificado |
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PBS TBS |
Blocker Casein |
Caseína purificada |
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PBS TBS |
Blocker BLOTTO |
Leite em pó desnatado |
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TBS |
Sem proteínas |
Composto não bloqueador de proteína |
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PBS TBS PBST TBST |
Pierce Fast Blocking Buffer |
Proteína purificada simples |
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TBS |
SuperSignal Western Blot Enhancer |
Tratamento de membrana para anticorpos de baixa abundância ou imunorreatividade baixa |
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Pronto para usar |
A remoção e nova sondagem de Western blots oferece várias vantagens:
- Conservação de amostras caras ou disponíveis apenas em quantidades limitadas;
- Análise de um determinado blot usando vários anticorpos diferentes, por exemplo, anticorpos específicos de subtipo ou isoforma;
- Reanálise de resultados anômalos e confirmação com o mesmo ou com um anticorpo diferente;
- Correção de erros de incubação com o anticorpo errado;
- Economia de custo em reagentes e tempo com a reutilização do mesmo blot.
Vários protocolos para remoção de anticorpos de Western blots foram publicados, incluindo aqueles que utilizam baixo pH, calor e detergente e agentes caotrópicos. Três protocolos recomendados são apresentados a seguir. O primeiro é aplicável a qualquer sistema de substrato quimioluminescente e usa uma combinação de detergente e calor para liberar os anticorpos. O segundo é comumente usado para aplicações onde os anticorpos devem ser separados de um antígeno e emprega baixo pH para alterar a estrutura do anticorpo de tal forma que o local de ligação não é mais ativo.
O terceiro protocolo emprega o kit de reciclagem de Western Blot ReBlot ™ Plus, que foi especificamente formulado para remover anticorpos de membranas de Western blot. Os benefícios desta abordagem incluem
- Evitar odores relacionados ao β-mercaptoetanol.
- Processamento à temperatura ambiente.
- Remoção de anticorpos em 15 minutos.
Nenhum desses métodos removerá os precipitados coloridos gerados a partir de sistemas de detecção cromogênica (por exemplo, BCIP, 4CN, DAB e TMB). No entanto, ainda é possível analisar o blot com outro anticorpo específico para uma proteína-alvo diferente.
Normalmente, esses protocolos devem ser usados apenas para fins qualitativos, a menos que tenha sido estabelecido que a remoção não afeta quantitativamente um determinado antígeno. Dependendo do método e do tipo de membrana usada, muitos antígenos resistirão a pelo menos 5 ciclos de remoção. No entanto, deve ser levado em consideração que durante cada ciclo de separação, pequenas porções de proteínas imobilizadas por membrana serão removidas. Quando vários antígenos devem ser detectados sequencialmente, é recomendado começar com antígenos que devem ocorrer em menor abundância ou produzir menos sinal.
Aqui estão algumas recomendações adicionais ao planejar um experimento de Western blot com uma ou mais rodadas de remoção de anticorpos.
- As membranas de PVDF são mais robustas do que a nitrocelulose e, portanto, são recomendadas para qualquer protocolo que envolva a remoção de anticorpos.
- A secagem das membranas de PVDF imediatamente após a transferência do gel SDS-PAGE melhora a ligação das proteínas à membrana e é particularmente recomendada quando a extração múltipla é planejada. Membranas de PVDF secas devem ser reumedecidas com álcool antes da primeira rodada de imunodetecção.
- Detecte primeiro os antígenos de baixa abundância.
- Use anticorpos de baixa afinidade antes de anticorpos de alta afinidade.
- Importante: Embora a secagem de um blot de PVDF seja recomendada imediatamente após a transferência, o blot não deve secar entre as rodadas de imunodetecção. Qualquer molécula residual de anticorpo se ligará permanentemente à membrana se esta secar.
WB / Antibody Stripping Buffer |
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20-abx090656 | Abbexa |
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WB / Antibody Stripping Buffer |
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abx090671-200ml | Abbexa | 200 ml | EUR 226.8 |
West Ez Stripping Buffer |
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S2100-006 | GenDepot | 60ml | EUR 97.2 |
West Ez Stripping Buffer, Economic Size |
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S2100-050 | GenDepot | 500ml | EUR 254.4 |
West Ez Stripping Buffer, Economic Size |
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S2100-100 | GenDepot | 2x500ml | EUR 336 |
Western blot recycling stripping buffer, 50 ml (10X) |
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90101 | Alpha Diagnostics | 50 ml | EUR 285.6 |
Phospho Antibody Stripping Solution |
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AKR-102 | Cell Biolabs | 1 kit | EUR 470.4 |
Description: This reagent allows you to strip phospho antibodies from protein blots and subsequently re-probe the same blot. |
Dura Mater Stripping Forcep Straight |
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INS6132 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | EUR 84.36 |
Dura Mater Stripping Forcep Angled |
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INS6134 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | EUR 84.36 |
T-Pro Western Blot Stripping Reagent |
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JB11-K002 | T-Pro Biotechnology | 500ml/BT | EUR 213.6 |
Antibody diluent buffer |
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AR1106-2 | BosterBio | 12ml | EUR 109.2 |
ADA buffer |
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AD0003 | Bio Basic | 25g | EUR 77.75 |
Wash Buffer |
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abx098952-20ml | Abbexa | 20 ml | EUR 109.2 |
Coating Buffer |
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abx098970-1vial | Abbexa | 1 vial | EUR 184.8 |
Blocking Buffer |
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abx098972-1vial | Abbexa | 1 vial | EUR 184.8 |
Lysis Buffer |
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abx098984-LysisBuffer120ml | Abbexa | Lysis Buffer 1 (20 ml) | EUR 184.8 |
Lysis Buffer |
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abx098984-LysisBuffer3100ml | Abbexa | Lysis Buffer 3 (100ml) | EUR 276 |
Lysis Buffer |
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abx098984-LysisBuffer420ml | Abbexa | Lysis Buffer 4 (20 ml) | EUR 184.8 |
Tricine buffer |
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20-abx082551 | Abbexa |
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Binding Buffer |
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abx290019-50ml | Abbexa | 50 ml | EUR 276 |