As proteínas infecciosas (príons) são, ironicamente, definidas por sua resistência à digestão proteolítica. Uma característica que define a isoforma transmissível da proteína prião (PrP Sc ) é a sua resistência parcial a digestão com proteinase K (PK). O diagnóstico da doença do prião tipicamente depende imunodetecção de PK-digerido PrP Sc por transfercia de Western, ELISA ou imuno-histoquímica de detecção. A digestão PK também foi usada para detectar diferenças nas cepas de príons. Assim, PK tem sido uma ferramenta crucial para detectar e, portanto, controlar a propagação de príons.
PK também foi usado como uma ferramenta para sondar a estrutura do PrP. Espectrometria de massa e anticorpos têm sido usados para identificar os locais de clivagem PK em PrP Sc . Estes resultados foram utilizados para identificar as mais acessíveis, estiramentos flexíveis que ligam os componentes de cadeia β em PrP Sc . Esses dados, combinados com as restrições físicas impostas pelos resultados espectroscópicos, foram usados para propor um modelo qualitativo para a estrutura do PrP Sc . Assumindo que PrP Sc é um solenóide β de quatro degraus, encadeamos a sequência de PrP para satisfazer os dados de proteólise PK e outras restrições experimentais.
Proteinase K, recombinant
Produtos biológicos, como proteínas terapêuticas, anticorpos monoclonais, vacinas e produtos de terapia celular e genética, têm se tornado cada vez mais importantes. Ao contrário das drogas sintetizadas quimicamente tradicionais que atuam em um bolso hidrofóbico de uma proteína para ativar ou inibir uma via de quinase, a ação farmacológica bioterapêutica se dá por meio da ligação ao seu alvo ou imunomodulação.
Devido à natureza complexa dos produtos biológicos, os cientistas encontram vários desafios, desde a descoberta inicial de medicamentos até o desenvolvimento. Por exemplo, durante a identificação de um clone com a imunogenicidade desejada que pode demonstrar especificidade de ligação ao alvo e modulação subsequente ou induzir a resposta imune desejada, e ainda durante a caracterização do clone, aumento de escala e produção desses produtos.
Desde a descoberta até a fabricação, o aproveitamento de drogas de moléculas grandes para criar terapias seguras e eficazes é complexo e caro. A PerkinElmer permite que os cientistas desenvolvam e otimizem todo o seu fluxo de trabalho biológico para que possam superar esses desafios e trazer medicamentos biológicos consistentes e de alta qualidade para o mercado mais rapidamente.
Durante os estágios iniciais da descoberta de drogas, é fundamental compreender a biologia alvo, o mecanismo de ação (MoA) usando a instrumentação mais precisa, incluindo automação e software para simplificar fluxos de trabalho complexos desde a seleção e expressão de clones até a descoberta e triagem.
Acelere sua descoberta biomolecular usando uma combinação de técnicas in vitro e in vivo com um software poderoso que transforma dados em percepções.
Imagem celular para validação de alvo in vitro
Imagem in vivo para descoberta de alvo
Visualização altamente interativa que facilita o rápido isolamento de compostos com base em critérios-chave para análise posterior
Em sílico
Proteinase K grade
Thermo Scientific Proteinase K é uma protease endolítica de amplo espectro amplamente utilizada para digestão de proteínas em preparações de ácido nucléico. Ele degrada as proteínas mesmo na presença de detergentes. Proteinase K cliva ligações peptídicas nos lados carboxílicos de aminoácidos alifáticos, aromáticos ou hidrofóbicos. A Proteinase K é classificada como uma serina protease. O menor peptídeo a ser hidrolisado por essa enzima é um tetrapeptídeo.
Destaques
• Solução pronta para uso • Ativo em uma ampla gama de condições de reação
Aplicações
• Isolamento de DNA genômico da cauda de camundongo • Isolamento de DNA genômico de células em cultura • Remoção de DNases e RNases ao isolar DNA e RNA de tecidos ou linhas de células • Determinação da localização da enzima • Melhorar a eficiência de clonagem de produtos de PCR
Nota
• A concentração de trabalho recomendada de Proteinase K é de 0,05 a 1 mg / mL. A atividade da enzima é estimulada por SDS 0,2 a 1% ou por ureia 1 a 4 M • Ca2 + protege a Proteinase K contra a autólise, aumenta a estabilidade térmica e tem uma função reguladora para o local de ligação do substrato da Proteinase K • Estável sobre um ampla faixa de pH: 4,0 a 12,5, pH ideal 7,5 a 8,0 • Atividade ótima de 50 a 55 ° C • Desnaturação rápida da enzima ocorre em temperaturas acima de 65 ° C.
