Kit de ensaio de peroxidação lipídica (MDA + HNE)

A peroxidação lipídica é um exemplo bem conhecido de dano oxidativo nas membranas celulares, lipoproteínas e outras estruturas contendo lipídios. A modificação peroxidativa de fosfolipídios insaturados, glicolipídios e colesterol pode ocorrer em diferentes reações. Eles podem ser desencadeados por i) espécies de radicais livres, como radicais oxil, radicais peroxil e radicais hidroxil derivados da redução mediada por ferro do peróxido de hidrogênio ou ii) espécies não radicais, como oxigênio singlete, ozônio e peroxinitrito gerado pela reação de superóxido com óxido nítrico.

Malondialdeído (MDA) e 4-hidroxialquenais são subprodutos tóxicos importantes da peroxidação lipídica. Assim, a medição das quantidades de tais aldeídos corresponde a um índice de peroxidação lipídica  in vitro  e  in vivo . 4-hidroxinonenal (4-HNE) é um produto principal da decomposição peroxidativa de ácidos graxos poliinsaturados ω-6 (PUFA). Possui propriedades citotóxicas, hepatotóxicas, mutagênicas e genotóxicas. Além disso, níveis aumentados de HNE foram encontrados no plasma e em vários órgãos sob condições de estresse oxidativo. Na verdade, o MDA é, em muitos casos, o aldeído individual mais abundante resultante da peroxidação lipídica. O  MDA in vitro pode alterar proteínas, DNA, RNA e muitas outras biomoléculas.

O kit de ensaio LPO da Bioquochem   mede as concentrações de MDA e HNE como um índice de peroxidação lipídica. Em primeiro lugar, o ataque catalisado por ácido na posição 3 do anel indol inicia as reações entre indóis e aldeídos (MDA e HNE). Como resultado, esta reação dá um diindolilalcano (cromóforo) com absorbância máxima na região de 580-620 nm.

Em nosso ensaio, um indol (Reagente A) reage rapidamente com MDA e HNE em meio ácido, produzindo um cromóforo (C) com alto coeficiente de extinção molar em seu comprimento de onda de absorção máximo de 586 nm.

 

• Resumo do Produto

  O Kit de Ensaio de Peroxidação Lipídica (MDA) (Colorimétrico / Fluorométrico) (ab118970) fornece uma ferramenta conveniente para a detecção sensível de malondialdeído (MDA).

  No protocolo de ensaio de peroxidação lipídica, o MDA na amostra reage com o ácido tiobarbitúrico (TBA) para gerar um aduto MDA-TBA. O aduto MDA-TBA pode ser facilmente quantificado colorimetricamente (OD = 532 nm) ou fluorometricamente (Ex / Em = 532/553 nm). Este ensaio detecta níveis de MDA tão baixos quanto 1 nmol / poço colorimetricamente e 0,1 nmol / poço fluorometricamente.

  O ensaio MDA também é conhecido como ensaio TBARS.

  Resumo do protocolo do ensaio de peroxidação lipídica:
  – adicionar solução de TBA às amostras e padrões, incubar a 95ºC por 60 min, resfriar em banho de gelo por 10 min
  – transferir para os poços da microplaca
  – analisar com leitor de microplaca
  Para maior sensibilidade, precipite com n-butanol, centrifugar, secar e ressuspender o pellet antes da análise.

  Protocolo chinês disponível.  Consulte a seção de protocolos abaixo.

  Para um ensaio MDA alternativo, sem as etapas de aquecimento exigidas no ensaio TBARS, tente o ensaio MDA ab233471.

  

• Notas

  A peroxidação lipídica refere-se à degradação oxidativa dos lipídios. Nesse processo, os radicais livres retiram elétrons dos lipídios (geralmente nas membranas celulares), resultando em danos às células. A quantificação da peroxidação lipídica é essencial para avaliar o estresse oxidativo. A peroxidação lipídica forma aldeídos reativos como o malondialdeído (MDA) e o 4-hidroxinonenal (4-HNE) como bi-produtos naturais. O malondialdeído (MDA) e o 4-hidroxinonenal (4-HNE) são frequentemente usados ​​como marcadores de peroxidação lipídica e para avaliar o dano oxidativo / estresse oxidativo.

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  Revise o marcador de estresse oxidativo e o guia de ensaio ou o guia de ensaio de metabolismo completo para saber mais sobre ensaios para metabólitos, enzimas metabólicas, função mitocondrial e estresse oxidativo e também como avaliar a função metabólica em células vivas usando seu leitor de placa.

  Veja também o popular 4-HNE Assay Kit ab238538 como um marcador alternativo de peroxidação lipídica e estresse oxidativo.

  
  Como outros pesquisadores usaram o kit de ensaio de peroxidação lipídica ab118970

  O kit de ensaio MDA / TBARs tem sido usado em publicações em uma variedade de tipos de amostra, incluindo:
  – Humano: soro ¹ , extratos de células primárias de hipocampo ² , lisados ​​de células de cultura A375 ³ , amostras de plasma e plaquetas ⁴
  – Camundongo: lisados ​​de células neuronais ⁵ , extrato de tecido do coração ⁶ , plasma ⁷ , extratos de células ⁸
  – Rato: extratos de tecido do hipocampo ⁹ , extratos de cardiomiócitos de células em cultura ¹⁰ , lisados ​​de pulmão ¹¹
  – Porco: soro ¹²

  ^{Referências: 1 – Shen J et al. 2018, 2 – Wang Q et al. 2019, 3 – Luo M et al. 2018, 4 – Mustafa AG et al. 2018, 5 – Murphy K et al. 2018, 6 – Guan F et al. 2019, 7 – Costa CRC et al. 2018, 8 – Eleftheriadis T et al. 2019, 9 – Malekiyan et al. 2019, 10 – Zhou Z et al. 2018, 11 – Li L et al. 12 de 2018 – Lee SE e Kang KS 2019}

• Plataforma

  Leitor de microplaca

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