O BrdU Cell Proliferation Assay Kit detecta 5-bromo-2′-desoxiuridina (BrdU) incorporada ao DNA celular durante a proliferação celular usando um anticorpo anti-BrdU. Quando as células são cultivadas com meio de marcação que contém BrdU, este análogo da pirimidina é incorporado no lugar da timidina no DNA recém-sintetizado de células em proliferação.
Após a remoção do meio de marcação, as células são fixadas e o DNA é desnaturado com nossa solução de fixação / desnaturação. Em seguida, um mAb de camundongo BrdU é adicionado para detectar o BrdU incorporado (a desnaturação do DNA é necessária para melhorar a acessibilidade do BrdU incorporado ao anticorpo de detecção). IgG anti-camundongo, anticorpo ligado a HRP é então usado para reconhecer o anticorpo de detecção ligado. O substrato HRP TMB é adicionado para desenvolver a cor. A magnitude da absorbância da cor desenvolvida é proporcional à quantidade de BrdU incorporada às células, o que é uma indicação direta de proliferação celular.
Inclui o produto
Quantidade (com contagem)
Cor da Solução
BrdU
1 x 150 µl
Solução de fixação / desnaturação
2 x 25 ml
MAb de detecção de mouse BrdU
1 x 500 µl
Verde
IgG anti-camundongo, anticorpo ligado a HRP
1 x 500 µl
vermelho
Diluente de Anticorpo de Detecção
1 x 50 ml
Verde
Diluente HRP
1 x 50 ml
vermelho
Tampão de lavagem 20X
1 x 50 ml
Substrato TMB 7004
1 x 50 ml
Solução STOP 7002
2 x 25 ml
BrdU Cell Proliferation ELISA Kit (colorimetric)
Fundo
Os nucleotídeos halogenados, tais como o análogo da pirimidina bromodeoxiuridina (BrdU), são úteis para marcar o DNA nascente em células e tecidos vivos. BrdU torna-se incorporado em replicação de DNA no lugar de timidina e a subsequente imunodetecção de BrdU usando anticorpos monoclonais específicos permite a marcação de células na fase S do ciclo celular. Após a marcação por pulso de células ou tecidos com bromodeoxiuridina, BrdU (Bu20a) mAb de camundongo pode ser usado para detectar BrdU incorporado em DNA de fita simples.
Principais recursos e detalhes
Sensibilidade: 40 células / poço
Tipo de amostra: células aderentes, células de suspensão
Método de detecção: Colorimétrico
Tipo de ensaio: Sanduíche (qualitativo)
5-bromo-2-desoxiuridina (BrdU) é um análogo da pirimidina. Ele é incorporado ao DNA recém-sintetizado de células em proliferação no lugar da timidina. O kit BrdU Cell Proliferation Assay da Biovision detecta BrdU incorporado usando um anticorpo anti-BrdU de camundongo. Um anticorpo secundário anti-rato ligado a HRP é usado para detectar o anticorpo anti-BrdU ligado a BrdU, que é seguido pela adição de TMB (um substrato HRP). A extensão do desenvolvimento da cor é proporcional à quantidade de BrdU incorporada às células e pode ser usada diretamente como um indicador de proliferação celular. Em comparação com outros ensaios de proliferação celular, este kit detecta apenas as células em proliferação e não as células semeadas. Este kit altamente sensível e não radioativo detecta menos de 50-100 células em proliferação.
