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BioMag Plus Concanavalin A

DESCRIÇÃO
Os métodos de separação baseados em contas e colunas dependem muito da velocidade e facilidade dos sistemas de ligação por afinidade. Ligantes como estreptavidina, anticorpos e
lectinas são usados ​​para capturar alvos marcados especificamente e para o isolamento de células e biomoléculas que expressam naturalmente o parceiro de ligação ao ligante.
As propriedades únicas de ligação de sacarídeos das lectinas vegetais, como a Concanavalina A (Con A), as tornaram úteis para a marcação e isolamento de células que apresentam glicano e glicoproteínas no soro e lisado celular. Além disso, as lectinas têm sido usadas em estudos de adesão celular, para efetuar a ativação de linfócitos e
para explorar a terapêutica baseada em carboidratos.
Nossas micropartículas BioMag Plus revestidas com Con A fornecem um meio conveniente para isolar glicoproteínas e
polissacarídeos contendo manosil e glucosil do soro ou lisado celular, ou para investigar outros processos mediados por lectina / glicano. O BioMag Concanavalin A também foi usado para
CUT & RUN, um protocolo de criação de perfil de cromatina que tem várias vantagens importantes sobre o ChIP. (ver referências)
CARACTERÍSTICAS
Concanavalina A (Con A) é covalentemente ligada a
partículas BioMag®Plus funcionalizadas para uso em isolamentos de glicoproteína de extratos celulares e séricos.
Con A é uma proteína de 104.000 Da composta por quatro subunidades idênticas e existe
como um dímero ou tetrâmero ativo dependendo do pH. Sua ligação a carboidratos
os parceiros são α-D-glicose e α-D-manose com grupos OH não modificados em
C-3, C-4 e C-6, e resíduos terminais de glicose de proteínas e peptídeos.
Con A aglutina os glóbulos vermelhos (RBCs), interage com
glicopeptídeos de imunoglobulina e é um mitógeno de linfócitos. Ele se liga a algumas bactérias.
A ligação de Con A é mediada por íons metálicos, que estabilizam em conformação. Cada
sítio de ligação requer íons de cálcio e manganês, e o uso de tampões com EDTA
ou outros quelantes de metal resultará na perda da capacidade de ligação de carboidratos.
Diâmetro médio: ~ 1,0 µm
Concentração: 5 mg / mL Limite de
Con A: determinado por A280

BioMag Plus Concanavalin A
BioMag Plus Concanavalin A

MATERIAL
Material fornecido
3mL ou 10mL de partículas revestidas com Con A em PBS 10mM com azida de sódio 0,1%
Material necessário
Tubos de microcentrífuga de 1,5mL ou 2mL
Soro de mamífero: 0,4mL de uma diluição 1:20 em PBS /
Tampão de ligação de teste : 1x PBS + NaN3 0,1%
+ 1mM MgCl2
+ 1mM MnCl2
+ 1mM CaCl2
(pH 7,4)
Tampão de lavagem: 1x PBS + 0,1% NaN3
+ 1mM MgCl2
+ 1mM MnCl2
+ 1mM CaCl2
(pH 7,4) + 0,1% Tween® 20
Con A partícula Tampão de Eluição: 5mM Tris (pH 8,0 ) + NaCl 0,15 M + SDS a 0,05% + pipetas de precisão de glicose 1M
com pontas descartáveis ​​para fornecer 20-200 µL, 200-1000 µL
Separador de tubo de microcentrífuga: Separador magnético de 1,5 mL (código de catálogo LS001) Separador de tubo de microcentrífuga BioMag Multi-6 (código de catálogo MS002)
Misturador de vórtice e rotador de tubo.

PROCEDIMENTO Os
pesquisadores são aconselhados a otimizar o uso de partículas em qualquer aplicação.
1. Prepare 0,4mL de amostra de soro diluindo 1:20 com PBS 10mM.
2. Transfira 1mL de partículas BioMag®Plus Con A para um tubo de microcentrífuga limpo. Coloque o tubo em um ímã para separar as partículas da solução.
Remova e descarte a solução com cuidado.
3. Lave as partículas adicionando 1mL de tampão de ligação. Misture bem.
4. Repita a lavagem de partículas mais uma vez. Após a última lavagem, remova o sobrenadante.

5. Adicione 0,1mL de tampão de ligação à amostra de soro do Passo 1. Adicione a amostra às partículas e misture bem por inversão ou vórtice para ressuspender as partículas.
6. Coloque a amostra em um rotador de tubo e misture por 10-30 minutos em temperatura ambiente.
7. Remova a amostra do rotador e coloque em um separador magnético. Remova cuidadosamente o sobrenadante limpo.
8. Lave as partículas adicionando 0,5mL de tampão de lavagem. Misture bem por inversão ou por mistura de vórtice.
9. Repita as etapas 7 a 8. Ressuspenda as partículas com 0,5mL de tampão de lavagem e coloque no rotor do tubo por 5 minutos.
10. Repita as etapas 7 a 9.
11. Substitua o tubo de partículas no separador magnético e remova / descarte cuidadosamente o sobrenadante.
12. Adicione 250 µL de tampão de eluição às partículas. Misture o tubo para ressuspender as partículas e coloque o tubo no rotador por 10-30 minutos em temperatura ambiente.
13. Substitua o tubo de partículas no separador magnético e remova cuidadosamente o eluato e transfira para um tubo de microcentrífuga limpo para uso posterior ou armazenamento.
14. Repita as etapas 12-13. Os eluatos podem ser agrupados e precipitados. Armazene os eluatos em gelo para uso imediato ou congele para armazenamento de longo prazo.
NOTAS
• Evite o uso de reagentes com EDTA ou outros quelantes de metal, pois isso reduzirá a eficácia do tampão de ligação.
• Inibidores de protease podem ser usados ​​quando glicoproteínas sensíveis são isoladas.
• A recuperação de baixa glicoproteína pode ser anexada aumentando o tempo de incubação de eluição além de 10 minutos e / ou fervendo as partículas em 200 µL de
tampão de amostra SDS-PAGE por 5 minutos e, em seguida, separando magneticamente as partículas do eluato. (Observação: a fervura pode separar algumas lectinas e
também pode liberar proteínas não especificamente ligadas.)
• Execute as amostras de eluato em um gel de eletroforese SDS-PAGE 4-20% Tris-Glycine e corar as bandas de glicoproteína usando o kit de coloração GlycoGel
(código de catálogo da Polysciences 24693) para visualizar.
• Após a coloração com GlycoGel, corar o gel usando Coomassie G250 (1mL ou 2mL de 0,5% de Coomassie G250 em 50% de metanol e 10% de ácido acético) para visualizar
outras bandas de proteína.
• A remoção de albumina e IgG das amostras de soro pode melhorar o isolamento de glicoproteínas de baixa concentração. Se desejar, use o
Kit de remoção de albumina BioMag® ProMax (código de catálogo BP658) e / ou o kit de remoção de IgG de soro BioMag® ProMax (código de catálogo BP659).

 

Número de catálogo Descrição Concentração (mg / mL) Volume (mL) Folha de dados do produto Ficha de Dados de Segurança
BM551 BioMag   Streptavidin 5 5, 50 PDS 551.pdf SDS MB232.pdf
BP628 Estreptavidina BioMag  Plus 5 10 PDS 621.pdf SDS MB232.pdf
BM568 BioMag  sem  estreptavidina nuclease 1 10, 25 PDS 530.pdf SDS MB232.pdf
BP621 Kit de ligação de estreptavidina / biotina BioMag   Plus 5 5 PDS 621.pdf SDS MB232.pdf
SDS MB255 Wash / Coupling Buffer.pdf

 

Concanavalin A (ConA)

05-0106-1000 1 g
EUR 199

Concanavalin A (ConA)

05-0106-10000 10 g Ask for price

Concanavalin A (ConA)

05-0106-100000 100 g Ask for price

Concanavalin A (ConA)

05-0106-250 250 mg
EUR 88

Concanavalin A (Con A) Antibody

20-abx101152
  • EUR 272.00
  • EUR 133.00
  • EUR 676.00
  • EUR 342.00
  • EUR 244.00
  • 100 ug
  • 10 ug
  • 1 mg
  • 200 ug
  • 50 ug

Concanavalin A ELISA Kit

20-abx052181
  • EUR 6439.00
  • EUR 3432.00
  • EUR 801.00
  • 10 × 96 tests
  • 5 × 96 tests
  • 96 tests

Concanavalin A, CF350 conjugate

29015 5x1mg
EUR 209
Description: Minimum order quantity: 1 unit of 5x1mg

Concanavalin A, CF488A conjugate

29016 5x1mg
EUR 209
Description: Minimum order quantity: 1 unit of 5x1mg

Concanavalin A, CF594 conjugate

29017 5x1mg
EUR 209
Description: Minimum order quantity: 1 unit of 5x1mg

Concanavalin A, CF633 conjugate

29018 5x1mg
EUR 209
Description: Minimum order quantity: 1 unit of 5x1mg

Concanavalin A, CF640R conjugate

29019 5x1mg
EUR 209
Description: Minimum order quantity: 1 unit of 5x1mg

Concanavalin A, CF680 conjugate

29020 5x1mg
EUR 240
Description: Minimum order quantity: 1 unit of 5x1mg

Concanavalin A, CF770 conjugate

29058 5x1mg
EUR 240
Description: Minimum order quantity: 1 unit of 5x1mg

Concanavalin A, CF405M conjugate

29074 5x1mg
EUR 219
Description: Minimum order quantity: 1 unit of 5x1mg

Concanavalin A, CF405S conjugate

29075 5x1mg
EUR 219
Description: Minimum order quantity: 1 unit of 5x1mg

Concanavalin A, CF750 conjugate

29080 5x1mg
EUR 240
Description: Minimum order quantity: 1 unit of 5x1mg

Concanavalin A (ConA) Antibody Pair

20-abx370219
  • EUR 1400.00
  • EUR 899.00
  • 10 × 96 tests
  • 5 × 96 tests

Concanavalin A (ConA) Antibody (Biotin)

20-abx271751
  • EUR 384.00
  • EUR 230.00
  • EUR 1052.00
  • EUR 523.00
  • EUR 300.00
  • 100 ug
  • 10 ug
  • 1 mg
  • 200 ug
  • 50 ug

Concanavalin A (ConA) CLIA Kit

20-abx190017
  • EUR 7645.00
  • EUR 4074.00
  • EUR 942.00
  • 10 × 96 tests
  • 5 × 96 tests
  • 96 tests

Concanavalin A (ConA) ELISA Kit

20-abx150329
  • EUR 6047.00
  • EUR 3228.00
  • EUR 754.00
  • 10 × 96 tests
  • 5 × 96 tests
  • 96 tests

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